PENGENALAN ALAT BAHAN DAN TEKNIS STERILISASI

Laporan Praktikum

Mikrobiologi dasar dan lingkungan

Nama               :

Nim                :

Kelompok      :7

Hari/Tanggal : 22 februari 2014

Waktu            : 08.00-12.00 WIB

PJP                 :

Asisten           :

                       :

PENGENALAN ALAT BAHAN

DAN TEKNIS STERILISASI

TEKNIK DAN MANAJEMEN LINGKUNGAN

PROGRAM DIPLOMA

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

2014

 

Alat

No	Nama	Gambar	Fungsi
1.	Biological Safety Cabinet / Laminar Air Flow		Berguna untuk bekerja secara aseptis karena BSC mempunyai pola pengaturan dan penyaring aliran udara sehingga menjadi steril.
2.	Oven		Berfungsi untuk sterilisasi kering. Cara memanaskan dengan suhu 180oC selama 1 jam.
3.	Autoklaf (Autoclave)		Digunakan untuk mensterilisasi suatu benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi (1210C/15 mnt)
4.	Inkubator (Incubator)		Alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu yang terkontrol.
5.	Tip Kuning		Berfungsi untuk  komponen penyimpanan cairan
6.	Tip Biru		Merupakan untuk komponen penyimpanan cairan
7.	Alcohol 70%		Berfungsi mensterilkan alat/suatu tempat sebelum bekerja
8.	Pengaduk/Penyebar Bakteri		Bermanfaat untuk menyebarkan cairan di permukaan mediaagar supaya bakteri yang tersuspensidalam cairan tersebut tersebar merata.
	Pembakar Bunsen (Bunsen Burner)		Berfungsi untuk menciptakan kondisi yang steril.
	Labu Erlenmeyer (Erlenmeyer Flask		Berfungsi untuk menampung larutan, bahan atau cairan. Digunakan untuk meracik dan menghomogenkan bahan-bahan komposisi media, menampung akuades, kultivasi mikroba dalam kultur cair, dll.
	Vortex mixer		Digunakan untuk menghomogenkan cairan dalam tabung  reaksi
	Mikropipet (Micropippete)dan Tip		Alat untuk memindahkan cairan yang bervolume cukup kecil, biasanya kurang dari 1000 μl. dalam penggunaannya, mukropipet memerlukan tip.
	Petridish (cawan petri)		Digunakan untuk menumbuhkan mikroba (bakteri).  Cawan petri terdiri dari dua bagian, yaitu alas dan tutup.
	Ose / Jarum Inokulum (inoculating loop)		Berfungsi untuk memindahkan biakan untuk ditanam/ditumbuhkan ke media baru. Inoculating needle cocok digunakan untuk inokulasi secara tusukan .
	Pipet		Berfungsi untuk mengambil cairan/larutan kimia dengan takaran sesuai ke inginan kita
	Bulp Orange		Berfungsi untuk memberikan tekanan pada saat pipet akan digunakan untuk mengambil cairan/larutan kimia
	Mikroskop		Berfungsi untuk melihat objek yang membutuhkan perbesaran tidak terlalu besar.
	Beaker glass (gelas piala)		Fungsinya adalah memanaskan media dalam bentuk cairan. Ukuran gelas piala bervariasi mulai 5 ml sampai 1000 ml.

Jenis-jenis sterilisasi

1. Sterilisasi dengan cara fisik

a.  Pemanasan
          Air dan uap adalah media panas yang baik. Dalam waktu relatif singkat, alat yang akan disterilkan akan mencapai suhu yang diinginkan. Udara adalah penyalur panas yang kurang baik. Oleh karena itu, untuk mecapai suhu yang diinginkan akan membutuhkan waktu yang cukup lama.
1.  Panas kering

Cara ini untuk membunuh mikroba hanya memakai udara panas kering yang tinggi. Sterilisasi panas kering dibedakan atas :

a.  Panas membara

Dengan jalan menaruh benda yang akan di sterilkan dalam nyala api bunsen sampai merah membara. Alat yang disterilkan yaitu sengkelit, jarum, ujung pinset dan ujung gunting.

b.  Melidah – apikan

Dengan melewatkan benda dalam api bunsen, namun tidak sampai menyala terbakar. Alat yang disterilkan yaitu scalpel, kaca benda, mulut tabung dan mulut botol.

c.  Udara kering

Oven merupakan ciri umum yang dimaksud. Alat ini terbuat dari kotak logam, udara yang terddapat di dalamnya mendapat udara panas melalui panas dari nyala listrik. Alat yang disterilkan yaitu tabung reaksi, cawan petri, pipet, scalpel dari logam, gunting dan botol. Pemanasan satu jam dengann temperatur 160 oC dianggap cukup.

2.  Panas Basah

Yang dimaksud panas basah adalah pemanasan menggunakan air atau uap air. Uap air adalah media penyalur panas yang terbaik dan terkuat daya penetrasinya. Panas basah mematikan mikroba. Oleh karena koagulasi dan denaturasi enzim dan protein protoplasma mikroba. Untuk mematikan spora diperlukan panas basah selama 15 menit pada suhu 121 oC. Sterilisasi panas basah dapat dibedakan atas tiga golongan yaitu:

a.  Panas basah <100 oC (Pasteurisasi)

Pasteurisasi yaitu pemanasan pada suhu 60 oC selama 30 menit. Pasteurisasi tidak dapat membunuh spora atau dipanaskan pada suhu 71,6 – 80 oC selama 15 – 30 detik kemudian cepat – cepat didinginkan.

b.  Panas basah pada suhu 100 oC

Di sini menggunakan air mendidih (suhu 100 oC) selama 10 menit. Untuk mematikan bentuk spora dilakukan pemansan 3 hari berturut – turut selama 15 – 45 menit sehingga spora yang tidak mati pada pemanasan pertama akan beruah menjadi bentuk vegetatif pada hari kedua steleh inkubasi pada shu 37 oC begituu pula spora yang tidak mati pada hari kedua, akan berubah menjadi bentuk vegetatif pada hari ketiga.

c.  Panas basah >100 oC

Sterilisasi dengan cara ini hasilnya mutlak steril, sehingga biasa dipergunakan di rumah sakit dan laboratorium besar. Cara ini menggunakan tangki yang diisi dengan uap air yang disebut autoclave. Alat yang disterilkan adalah alat dari kaca, kain kasa, media pembenihan, cairan injeksi, dan bahan makanan.

b.  Filtrasi / Penyaringan

Penyaringan dilakukan dengan mengalirkan larutan melalui suatu alat penyaringan yang memiliki pori – pori cukup kecil. Untuk menahan mikroorganisme dengan ukuran tertentu. Saringan yang umum digunakan tidak dapat menyaring virus. Penyaringan dilakukan dengan untuk mensterilkan cairan yang tidak tahan terhadap pemanasan dengan suhu tinggi seperti : serum, larutan yang mengandung enzim, toksin kuman, ekstrak  sel, antibiotik dan asam amino.

c.  Radiasi / Penyinaran

Mikroorganisme dapat dibunuh dengan penyinaran yang memakai sinar ultrraviolet yang panjang gelombangnya antara 220 – 290 nm. Radiasi paling efektif adalah 253,7 nm. Sinar matahari langsung mengandung sinar ultraviolet 290 nm, sehingga sinar matahari adalah sinar yang bersifat bakterida yang baik.

2.  Sterilisasi Dengan Cara Kimia

Zat kimia yang dapat digunakan untuk sterilisasi dapat berwujud :

a.  Gas : Ozon, formaldehyde, ethylene oxide gas

b.  Larutan : deterjen, yodium, alcohol, peroksida fenol, formalin, AgNO3 dan merkuroklorid

          Sterilisasi dengan cara kimia antara lain dengan disenfektan. Daya kerja antimikroba disenfektan ditentukan oleh konsenntrasi, waktu dan suhu. Beberapa contoh desinfektan yang digunakan antara lain : Desinfektan lingkungan misalnya :

1.  Untuk permukaan meja : lisol 5%, formalin 4% dan alcohol.

2.  Untuk di udara : natrium hipoklorit 1%, lisol 5% atau senyawa fenol lain

3.  Desinfektan kulit atau luka : dicuci denngan air sabun, providon yodium dan etil alkohol 70%.

(Lay, 1982)

3.  Sterilisasi Secara Mekanik

Filter Bakteri

         Cara kerja dari sterilisasi ini berbeda dari metode lainnya karena sterilisasi ini menghilangkan mikroorganisme melalui penyaringan dan tidak menghancurkan mikroorganisme tersebut. Penghilangan mikroorganisme secara fisik melalui penyaring dengan matriks pori ukuran kecil yang tidak membiarkan mikroorganisme untuk dapat melaluinya. Cara sterilisasi ini untuk produk berupa cairan yang dapat disaring atau bahan yang tidak tahan terhadap panas dan tidak dapat disterilkan dengan cara sterilisasi lain. Teknologi tinggi membran filtrasi meningkatkan penggunaan sterilisasi filtrasi, khusunya jika digunakan berpasangan dengan sistem proses aseptik.

         Keefektifan sterilisasi filtrasi dapat merupakan fungsi magnitude dari beban mikroorganisme, selama tersumbat pada penyaring dapt terjadi pada konsentrasi yang tinggi dari mikroorganisme. Tekanan, laju aliran, dan karakteristik dari peenyaring adalah parameter yang harus dikontrol untuk mencapai sterilisasi pada produk yang dapat diprediksi dan reproduksibel. Ukuran nominal pori penyaring 0,2 μm atau kurang dan penyaring dibuat dari berbagai jenis bahan seperti selulosa asetat, selulosa nitrat, florokarbonat, polimer akrilik, polikarbonat, poliester, polivinil klorida, vinil, nilon, politef, dan berbagai tipe bahan lain termasuk memban logam.

         Larutan dapat dibebaskan dari organisme vegetatif dan spora bakteri dengan melalui filter bakteri, filter bakteri tidak membebaskan larutan dari virus. Bagaimanapun alat ini tidak mengurangi jumlah dan adanya virus, secara prinsip oleh adsorbsi pada dinding filter dan penghilangan partikel besar dari bahan yang mengandung virus.

         Sterilisasi dengan filter bakteri digunakan untuk larutan farmasetik atau bahan biologi yang tidak diefektifkan oleh panas. Berbeda dengan metode filtrasi lain, filter bakteri ditujukan untuk filtrasi bebas bakteri. Metode sterilisasi ini membutuhkan penggunaan teknik aseptik yang benar. Sediaan obat yang disterilkan dengan metode ini dibutuhkan yang mengandung bahan, bakteristatik, kecuali dinyatakan lain. Larutan yang ditujukan untuk injeksi intratekal atau merupakan larutan dosis tunggal intravena dengan volume lebih dari 15 ml, tidak boleh ditambahkan bahan bakterisida. Paraffin cair dan minyak lain, tidak disterilkan dengan metode ini karena dapat meningkatkan permeabilitas dari filter bakteri. Untuk membuat larutan bebas dari bakteri dan steril, filter dengan berbagai tipe digunakan. Tipe ini termasuk filter yang terbuat dari silikon murni (diatomaccus atau klesegurh), porcelin, asbes dan gelas fritled. Karena alat-alat ini mudah dibersihkan filter seitz yang menggunakan lapisan asbes dan filter-glass mungkin lebih berguna untuk farmasis.

Filter seitz

         Bagian dari filter ini dibuat dari bahan asbestos yang dijepit pada dasar wadah besi. Keuntungan utama dari filter seitz adalah lapisan filter dapat dibuang setelah digunakan dan untuk masalah ini pembersihannya berkurang. Efisiensi dari filter ini tergantung pada pengembangan serat dan lapisan filter oleh air. Karena larutan alkohol pekat tidak mengembang, filter ini tidak digunakan untuk mensterilkan larutan yang mengandung alcohol dengan jumlah besar. Filter ini mampu dengan kapasitas volume dari 30 ml hingga lebih 100 ml. Kerugian pertama dari filter ini cenderung memberikan komponen magnesium pada filtrat. Bahan alkalin ini dapat menyebabkan pengendapan dari alkaloid bebas dari garamnya dan dapat menginaktifkan bahwa yang sensitiv seperti insulin, ekstrak pituitary, epinefrin, dan apomorphin.

Filter Swinny

         Sebuah adaptasi dari filter seitz, filter swinny mempunyai adaptor khusus yaitu terdiri dari lapisan asbes, bersama dengan layer dan pencuci. Keutamaan untuk digunakan filter swinny di bungkus dengan kertas dan autoklaf. Bagian yang dipotong dihubungkan pada spoit werlock dan cairan dimasukkan ke potongan asbes dengan menggunakan tekanan pada sal spoit.

Filter Fritted-Glass

         Filter Sintered Fritted-Glass dapat dihancurkan oleh kandungan dalam serbuk, tombol bulat dari gelas digabungkan bersama dengan penggunaan panas untuk menempatkan ukuran dari bentuk potongan. Permeabilitas dari filter berbanding lurus dengan berkembangnya ukuran. Setelah potongan dibentuk, potongan disegel dengan pemanasan didalam gelas pirex seperti corong Buchner.

Filter Berkefeld dan Mandler

         Mandler terbuat dari tanah silika murni, asbestos dan kalsium sulfat. Berkefeld disusun juga dari tanah silika murni. Masing-masing filter bermuatan negatif. Tersedia dalam beberapa prioritas berdasarkan permeabilitasnya ke dalam air dalam Bekerfeld atau Mandler.

Filter Selas

         Filter ini secara kimia, menjadi resistensi terhadap semua larutan yang tidak menyerang silika. Karena masing-masing partikel meliputi filter semata-mata bersama selama proses manufaktur, ada bahaya kecil partikel-partikel dari filter jauh dalam larutan.

Filter Candles-Pasteur-Chamberland

         Ada pemanasan dengan Bekerfeld tetapi dibuat dari pori porselen tak berkaca dengan pori kecil yang menghasilkan filtrasi lambat.

Media

Nama	Selektif/Umum	Padat/Cair	Fungsi
eosin methylene blue agar	Selektif	Padat	Media berkembang/tumbuh bakteri Ecoli
SS Agar	Selektif	Padat	Media tumbuh bakteri salmonella dan shigella
Potato Dextrose Agar	Selektif	Padat	Untuk media tumbuh jamur
Sodium Chloride	Umum	Cair	Penambah nutrient untuk media
Nutrient Agar	Umum	Padat	Untuk menumbuhkan bakteri yang tidak bisa tumbuh Pada media selain yang diinginkan
Plate-Count-Agar	Umum	Padat	Untuk media umum, semua jenis bakteri bisa tumbuh
Lactose Broth	Umum	Cair	Untuk menumbuhkan bakteri gram negative

Daftar Pustaka:  http://naynutrisi.com/Blog/mikrobiologi-pangan-sterilisasi-alat- 

       Mikrobiologi ,pada tanggal 20 Februari 2014, jam 20:47 WIB

       Laboratorium Mikro Diploma IPB.